1、培养细胞至对数生长晚期，显微镜观察其外观、形态、有无污染等，取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞，用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化，进行细胞计数；如为悬浮生长细胞，进行细胞计数。

2、500～1000g 离心 5min，弃上清。

3、加入适量的通用细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到 1～10×10 6 /ml，置于冻存管中，密闭、不要拧的太紧，避免弯曲变形。

4、一般遵循 1℃/min 的速率进行冷冻。亦可采用 4℃ 20min，-20℃ 30min，-70℃ 过夜，最后置于液氮罐中长期存储。

1、 注意在超净工作台内无菌操作，尽量避免污染。

2、 初次使用融化后可在 4℃保存 1 个月，但应减少反复冻融的次数，以免失效。

3、 杂交瘤细胞冻存时应定期复苏，检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性。

4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。