Minimal SD Agar Base
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SD(synthetically defined)系列培养基属于Minimal medium,也可以称为不完全培养基。Minimal SD Base由硫酸铵、微量元素、葡萄糖按比例混合而成,可以提供野生型酵母菌维持生存所需的基本物质,但不包含突变菌株必需的氨基酸。Minimal SD Agar Base在前者基础上加入Agar。Minimal SD Base Gal/Raf由硫酸铵、微量元素、半乳糖及棉子糖混合而成;Minimal SD Base Gal由硫酸铵、微量元素、半乳糖混合而成;Minimal SD Base Raf 由硫酸铵、微量元素、棉子糖混合而成,对应的固体培养基均在其基础上加入Agar。
缺陷氨基酸混合物添加到Minimal SD Base中可以配制成筛选培养基,用于选择培养含有特异载体的酵母或进行杂交筛选。例如,Minimal SD Base添加DO Supplement-Leu或DO Supplement-Trp分别用于筛选bait和prey载体(bait和prey载体带有合成色氨酸和亮氨酸的基因)。携带这两个载体的酵母细胞可以在双缺筛选培养基SD/-Leu/-Trp(Minimal SD Base添加DO Supplement-Leu/-Trp)生长,而不含有这两个基因的亲代酵母菌株(如Y2H Gold)不能生长。
使用方法:
Minimal Liquid Media with Glucose (Broth)
1. 在1 L去离子水中加入相应量的Minimal SD Base和Dropout Supplements(缺陷型氨基酸混合物),搅拌溶解。
2. 调节pH 至5.8。121℃高压灭菌15分钟。
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
Minimal Plating Media with Glucose and Agar
1. 在500 ml去离子水中加入相应量Minimal SD Agar Base和Dropout Supplements(缺陷型氨基酸混合物),搅拌溶解(琼脂在高温灭菌后溶解)。
2. 调节pH 至5.8。121℃高压灭菌15分钟。
3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中,室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。
为什么我做的平板不凝?
自行添加Agar,务必选用优质Agar(CA1331),添加量为20 g/L。固体培养基不凝固可能是由于pH值偏低或者灭菌时间过长(也会降低pH值);水质偏酸也会使得培养基偏酸,建议灭菌前调整SD系列培养基的pH至5.8。121℃,高压灭菌15min,及时从灭菌锅内取出培养基。
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