WAT11感受态细胞
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产品储存:-80 ℃保存,6个月有效。
产品组成:
基因型:
MATa leu2-3, 112 trp1-1 can1-100 ura3-1 ade2-1his3-11,15。
使用方法:
1. 取WAT11感受态细胞100 µL于冰上融化,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA(95-100℃,5min,快速冰浴,重复一次)10 µL,PEG/LiAc 500 µL并吹打几次混匀,30℃水浴30 min (15min时翻转6-8次混匀)。
2. 将离心管置于42℃水浴15 min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400 µL重悬,离心30s弃上清。
4. ddH2O 50 µL重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
5. 筛选培养基可选本公司SD系列产品,产品链接(http://www.coolaber.com/Column_Content.asp?Column_ID=48766)
注意事项:
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. 酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae WAT11菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm 克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h 培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90 h培养可见直径1 mm克隆。
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